乐鱼,化妆品中激素类成分的检测方法

时间：2023-12-31

化装品中激素类成份的检测方式

Determination of Hormone Components in Cosmetics1 规模

本方式划定了采取高效液相色谱-质谱法测定化装品中的激素类成份，包罗定性与定量。

本方式合用在膏霜乳液类、液态水基类、液态油基类、凝胶类、面膜类等化装品中激素类成份的定性与定量。

2 方式撮要

样品以乙腈为溶剂提取，采取高效液相色谱仪分手，质谱检测器检测，按照保存时候和特点离子对的相对品貌比定性、定量离子对峰面积定量，以尺度曲线法计较含量。

本方式对63种激素类成份的检出限、定量下限和取样量为0.2 g时的检出浓度、最低定量浓度见表1。

表1 63种激素类成份的检出限、定量下限、检出浓度和最低定量浓度3 试剂和材料

除还有划定外，本方式所用试剂均为阐发纯或以上规格，水为GB/T 6682划定的一级水。

3.1 乙腈：色谱纯。

3.2 正己烷：色谱纯。

3.3 50%乙腈溶液：取乙腈、水等体积夹杂，摇匀。

3.4 70%乙腈溶液：取乙腈、水按体积比7:3夹杂，摇匀。

3.5活动相的配制：

活动相A：水

活动相B：乙腈（3.1）

3.6尺度贮备溶液

别离称取各激素尺度品（表1）10 mg（切确到0.00001 g）置在50 mL容量瓶中，加乙腈（3.1）使消融并定容至刻度。

4 仪器和装备

4.1液相色谱-三重四极杆质谱联用仪。

4.2阐发天平。

4.3离心计心情。

4.4超声波清洗仪。

4.5涡旋夹杂仪。

5 阐发步调

5.1夹杂尺度溶液的制备

别离取各激素尺度贮备溶液（3.6）适当，用5��APP0%乙腈溶液（3.3）配制成浓度在定量下限四周的溶液。

注：尝试室完成份析方式的优化后，如可以或许连结仪器、色谱前提、质谱测定参数等阐发前提固定，测定目标重现性杰出，可随行质控尺度品溶液取代63种激素夹杂尺度品溶液对阐发前提的不变性、成果的反复性进行节制。如产生更改仪器、色谱前提、质谱前提等环境，均需从头对各组分进行定位。

质控尺度贮备溶液：称取曲安奈德、卤美他松、哈西奈德、地塞米松、地塞米松醋酸酯、氟氢缩松、倍他米松戊酸酯、氯倍他索丙酸酯、环索奈德、雌二醇、己烯雌酚尺度品各约10 mg（切确到0.00001 g）置在100 mL容量瓶中，用乙腈（3.1）消融并定容至刻度，作为质控尺度贮备液。置-20℃保留。对质谱响应较弱的成份，尝试室可自行增添该成份作为质控尺度物资，以提高筛查正确性。

质控尺度夹杂溶液：别离量取质控尺度贮备溶液适当，用50%乙腈溶液（3.3）配制成浓度在定量下限四周的溶液。5.2 样品处置

5.2.1 膏霜乳液类、液态水基类、凝胶类、面膜类样品

称取样品0.2 g（切确到0.001g），置在10 mL具塞比色管中，插手少许乙腈（3.1），在涡旋夹杂仪上振荡30s至试样与提取溶剂夹杂平均，然后插手乙腈至近刻度，超声提取20 min，静置至室温，用乙腈（3.1）定容至刻度，摇匀，以4000 r/min离心10 min，滤过（需要时取上清液适当用50%乙腈溶液（3.3）稀释，稀释液经0.22 μm滤膜过滤），滤液作为待测溶液。

5.2.2 液态油基类

称取样品0.2 g（切确至0.001g），置在离心管中，插手2 mL正己烷（3.2），在涡旋夹杂仪上分离，然后插手70%乙腈（3.4）3 mL，涡旋振荡2 min，4000 r/min离心10 min，吸收基层溶液至10 mL比色管中，上层正己烷层用70%乙腈（3.4）3 mL，自“涡旋振荡2 min，…”起，反复上述步调一次，归并两次溶液，加50%乙腈（3.3）定容至刻度，滤过（需要时用适当50%乙腈溶液（3.3）稀释，稀释液经0.22 μm滤膜过滤），滤液作为待测溶液。

5.3仪器参考前提

5.3.1 参考色谱前提

色谱柱： C18柱（150 ×2.0 mm，2.2 μm），或等效色谱柱。

活动相梯度洗脱法式：流速：0.3 mL/min；

柱温：40 ℃；

进样量：10 μL；

5.3.2 质谱前提

离子源：电喷雾离子源（ESI源）；

监测模式：正离子、负离子多离子反映监测模式，监测离子对和相干参数设定见表2。

表2 63种激素类成份监测离子对和相干参数设定表注：“*”为定量离子对

5.4 定性

取待测溶液与尺度溶液在不异阐发前提下测定，样品中如显现定量离子对和定性离子对的色谱峰，被测成份的特点离子峰保存时候与尺度溶液对应的保存时候分歧，且选择的定性离子的相对品貌比与相当浓度尺度品溶液的定性离子的相对品貌比的最年夜误差不跨越表3的划定，则能够鉴定样品中具有对应的激素成份。

注：如利用质控尺度夹杂溶液，应知足以下质控前提：①各成份均检出响应的特点离子对，②特点离子对信噪比SN≥7，③保存时候相对误差在±3%内。当样品中检出疑似阳性成份时，应随行响应的尺度溶液进行确证。

表3 定性鉴定时离子相对品貌的最年夜答应误差5.5 定量

5.5.1 尺度贮备溶液的制备

称取待测激素尺度品约10mg（切确到0.00001 g），置100 mL容量瓶中，用乙腈（3.1）使消融并定容至刻度。

5.5.2系列基质尺度溶液的制备

取与待测样品基质类型不异空白样品6份在10 mL比色管中（0.2 g/份），别离插手尺度贮备溶液适当，依照“5.2样品处置”的操作步调处置，然后用50%乙腈溶液（3.3）配制系列基质尺度溶液。此中氟氢缩松、卤美他松、哈西奈德、雌二醇、雌三醇、雌酮浓度为6、10、20、30、40、60 ng/mL，其余组分浓度为 2、4、10、20、40、60 ng/mL（尺度溶液浓度规模可按照现实环境进行调剂）。

5.5.3 样品处置：同5.2

5.5.4 测定

取系列基质尺度溶液顺次进样，记实定量离子对色谱峰面积并绘制峰面积（A）-浓度（C）尺度曲线，其线性相干系数r≥0.99。取待测溶液进样，测得定量离子色谱峰面积，按照尺度曲线获得待测溶液中各成份的浓度，按“6”计较样品中各成份的含量。

6阐发成果的表述

6.1计较

式中： ω——样品中激素类组分的质量分数，g/g；

ρ——从尺度曲线获得待测组分的质量浓度，g/mL；

V——样品定容体积，mL；

m——样品取样量，g；

D——稀释倍数（如未稀释则为1）。

在反复性前提下取得的两次自力测试成果的绝对差值不得跨越算术平均值的15 %。

6.2 收受接管率和周详度